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PEI轉染試劑Polysciences MW25000 MW40000

價格:

規格: MaxFect Transfection Regent(1ml) PEI MW25000(1g)

聯系方式:I47-825O-882O

買家導航

線性聚乙烯亞胺Polyethylenimine產品基本信息

產品名稱: PEI轉染試劑、Polyethylenimine、線性聚乙烯亞胺、線性PEI、轉染級別PEI
英文名稱:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)
(Polysciences#23966-1 1g; Polysciences#23966-100  100mg)
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)
 (Polysciences#24765-1 1g; Polysciences#24765-100  100mg)
 
規格: 1 g,  1 ml
產品目錄號:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)                       1g          Polyscience#23966-1
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)   1g          Polyscience#24765-1
MaxFect  Transfection Regent   1ml       Biofeng# A609
 
貯存條件: 避光,-20度
CAS號:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)   CAS Number: 9002-98-6, 26913-06-4 
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)   CAS Number: 49553-93-7
MaxFect Transfection Regent       CAS Number: 49553-93-7       
 
物理性狀: 固體為白色或近白色粉末。 1 mg/mL水溶液透明,接近無色或略顯黃色。

用途:

細胞培養級別的質粒轉染。本產品僅供科研使用,不能用于臨床治療。
PEI MW25000和PEI Max MW40000區別:

PEI MAX MW40000 ( Polysciences#24765-1)是線性化聚乙烯亞胺PEI MW25000(Polysciences#23966-1)的升級產品,是一種功能更為強大的高效瞬時轉染試劑。PEI MAX MW40000與PEI 25000的區別在于:
1)完全水解(去乙;
2)PEI 25000的鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性
3)含更長連續性乙烯亞胺片段,其轉染效率比PEI MW25000提高11%以上。
4)PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用,并且更高效。PEI 25K轉染溶液通常需要幾個小時才能制備,而PEI MAX 40K可以在兩個小時內轉化為即用型可溶性溶液。
5)PEI 25K含有4-11%的殘余丙;,可防止聚合物主鏈與DNA強烈結合。PEI MAX 40K完全去乙;慕Y構意味著每批產品的表現始終如一,穩定性更強。

儲存濃度:

1 mg/ml

工作濃度:

3 ug/ml 左右,每ml培養基加入3 ul儲存液。
PEI轉染試劑配置方法:
1. 稱取100mg PEI轉染試劑,溶解于100ml無菌水中。配置的終濃度是1 mg/ml.
2. 緩慢使用稀鹽酸,調節PH至7.0,一定不要讓pH過了,一旦過了效果就不好了。
3. 使用0.1um或者0.22um無菌過濾器,過濾除菌。
4. 分裝成每管500ul-1ml,-20度,保存,備用。
5. 使用超純水配置,器具一定要滅菌干凈,防止支原體污染。
 
適用范圍:

本產品適用于絕大多數真核細胞質粒轉染:HEK 293,293T,A549,B16F10,HeLa,Hepa 1-6,Hepa-1c1c7,HepG2,BHK-21,C2C12,C6,CHO-K1,COS-1,COS-7,Daoy,DU 145,K562,KB,LL/2(LLC1), LNCaP-FGC,MCF-7,MEL,Neuro-2a,NIH3T3,OVCAR-3,PC-3,PC-12等。
細胞培養基:
PEI轉染試劑適用于大多數常用細胞培養基,且轉染前后不需要更換培養基,血清的存在不影響轉染效率。
 
轉染時細胞密度:
一般來說,當細胞密度達到60% - 80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率。然而,不同細胞的最適轉染密度都不盡相同。因此在初次轉染某種細胞時,可以通過預實驗先確認該細胞最佳的轉染密度。
轉染質粒純度和濃度:

用于細胞轉染的DNA應具有較高的純度,且無內毒素殘留(推薦使用無內毒素質粒大提試劑盒進行質粒抽提)。質粒濃度盡量高一些,建議大于500 ng/ul.
轉染比例:
DNA:PEI = 1:3
1ml細胞培養液,建議使用1 ug-3 ug DNA 和3 ul - 9 ul PEI轉染試劑儲存液。具體根據細胞情況自由調整。
在初次轉染某種細胞時,推薦PEI和DNA的比例為2:1,即1 μg DNA使用2 μl PEI。轉染1 μg DNA所使用的PEI轉染試劑劑量可以在1 - 5 μl之間進行調整以獲得最佳的轉染效率。
 
轉染后細胞培養時間:
對于絕大多數細胞實驗而言培養24 - 48 h即可,如實驗情況特殊可在12 - 72 h之間進行優化。
細胞轉染步驟:
以6孔板細胞培養轉染為例:

使用細胞培養液3ml,DNA質粒3ug,PEI轉染試劑9ug?梢愿鶕煌毎匦,增加DNA和PEI使用量。

細胞培養
1. 轉染前24 h左右對細胞進行傳代,接種密度約為1 - 3 × 105 cells/well。細胞接種密度,大約在60%左右。
2. 過夜培養。
3. 吸出培養液,使用新鮮培養液清洗3-4次。然后,加入2.7 ml新鮮配置的完全培養基。因為細胞過夜生長的分泌物有可能影響轉染效率,所有建議進行細胞清洗操作。更換新鮮培養液,有助于轉染后的細胞表達和生長,防止細胞營養的不足。
     也可以不吸出培養液,不更換新鮮培養液,直接進行細胞轉染。
4. 當細胞匯合度達到60% - 80%時,轉染可以取得較高的轉染效率。

PEI/DNA復合物配置
1. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基,并加入3 ug DNA質粒,用移液器輕輕混勻。
2. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基,并加入9 ug PEI轉染試劑儲存液,用移液器輕輕混勻。
3. 將PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中,用移液器輕輕混勻,室溫靜置15 - 30 min后可用于轉染。注意:形成的PEI/DNA復合物溶液盡量在30 min內使用。
4. PEI/DNA復合物的形成,一定是分別在無血清培養基中稀釋后,再進行混勻。血清的存在會干擾復合物的形成。

細胞轉染
1. 將PEI/DNA復合物混合液滴加至6孔板培養基中,輕輕晃動吹打培養液使PEI/DNA復合物均勻分散。
2. 過夜培養24-72小時。
初始轉染條件: PEI質粒轉染體系
PEI轉染效率:
細胞種類                 中文名稱                         PEI 轉染效率
HEK293                 人胚腎細胞                       90%-95%
293-T                     人胚腎細胞                       90%-95%
CHO-K1                 倉鼠卵巢細胞                   80%-90%
U251                     人源神經膠質瘤細胞         80%-90%
Hela                      人源宮頸癌細胞                70%-80%
COS7                    猴 SV40 轉化腎細胞         70%-80%
HepG2                  人源肝癌細胞                    70%-80%
NIH/3T3                小鼠胚胎成纖維細胞          60%-70%
膠質瘤干細胞       人源膠質瘤干細胞              60%-70%
Patu8988             人源胰腺癌細胞                  60%-70%
U2OS                   人源骨肉瘤細胞                  60%-70%
產品圖片:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) 
(Polyscience#23966-1 1g)

PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) 
 (Polyscience#24765-1 1g)

PEI轉染試劑MW25000產品圖片   PEI轉染試劑MW40000產品圖片

參考文獻和操作文檔:

PEI MW25000轉染試劑使用方法
PEI MAX轉染貼壁和懸浮細胞方法
PEI MW25000(Polyscience#23966)轉染試劑配置方法
PEI MW25000轉染試劑配置方法2
PEI MAX MW4000轉染試劑配置和使用方法
PEI質粒轉染細胞方案
PEI質粒轉染293T細胞實驗方案
PEI轉染懸浮細胞293F操作方法
PEI MAX轉染質粒Expi293懸浮細胞實驗方案
PEI 轉染質粒AAV腺病毒擴增案例
PEI轉染質粒慢病毒擴增案例
PEI轉染質粒擴增第三代慢病毒方案
PEI轉染質粒擴增逆病毒方案
PEI轉染質粒擴增狂犬病EIAV病毒實驗方案

PEI轉染試劑質粒轉染效果圖


PEI轉染試劑效果圖


PEI轉染試劑效果圖

PEI轉染試劑效果圖


PEI轉染細胞常見問題與解決方案


. 轉染效率偏低

1. PEI與DNA的比例不合適
通過預實驗優化ExFect與DNA的最佳比例:在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范圍內嘗試,優化DNA的使用量:以24孔板為例,在0.5 - 2 μg/孔范圍內優化(具體可參見表一)。在后續的實驗中選擇轉染效率高、細胞毒性低的比例進行轉染。

2.PEI原液或/和DNA原液未經無血清培養基稀釋直接混合
PEI和DNA需分別在無血清培養基條件下按一定比例稀釋后再進行混合孵育。
 
3. 轉染時細胞密度不合適
多數情況下,當細胞匯合度達到60% - 80%時,轉染可以取得較高的轉染效率。然而細胞類型不同,最適的轉染密度也不盡相同?梢酝ㄟ^預實驗優化細胞轉染密度。
 
4.DNA質量偏低(降解或內毒素)
為實現高效率、低毒性的轉染,應使用高純度、無菌、無內毒素的質粒DNA。
 
5.PEI/DNA復合物形成的反應體系中包含血清
當ExFect/DNA復合物形成反應體系中存在血清時,ExFect/DNA復合物無法正常形成。
 
6.轉染體系中存在轉染抑制因素
當轉染體系中存在多聚陰離子聚合物時(例如:硫酸葡聚糖、肝素等),轉染將無法正常進行。因此應避免上述物質存在于細胞轉染體系中。
 
7.細胞狀態偏差
傳代次數太少或者太多都將導致細胞轉染效率的改變。因此,為了提高轉染效率以及轉染穩定性,應盡量使用適度傳代的細胞系,并盡量在平行實驗時保持細胞傳代次數的一致性。另外,支原體的感染或爆發會影響細胞的轉染效率。建議使用支原體檢測和/或清除試劑盒處理。


 
轉染后細胞狀態差

1.轉染后細胞培養時間過長
多數情況下,在完全培養基中進行轉染,24 h內無需換液處理,但是培養時間過長可能會導致細胞狀態較差,建議根據實驗需要合理安排后續實驗時間。
 
2.轉染時細胞密度不合適
多數情況下,當細胞匯合度達到60% - 80%時轉染可以取得較高的轉染效率。細胞密度過低導致細胞生長緩慢,對外來刺激變得較為敏感,使得轉染毒性增高。細胞密度過高,會導致細胞發生接觸抑制,加快細胞凋亡。
 
3.PEI/DNA過量
轉染試劑過量會導致較高的細胞毒性。嘗試降低轉染試劑的使用比例或者減少DNA用量,具體比例參見表一。
 
4.PEI/DNA復合物加入培養基時分布不均勻
局部ExFect/DNA復合物濃度過高是導致細胞毒性偏高的最常見的原因之一。當PEI/DNA添加到細胞培養孔/皿之后,應即刻輕輕搖動培養板/皿,使之完全混勻。
 
5.細胞狀態偏差
傳代次數太少細胞狀態未恢復,或者傳代次數太多細胞老化,都將由于細胞生長狀態不適而導致轉染試劑毒性增加。因此應盡量使用適度傳代的細胞,降低細胞代次差異對實驗結果造成的影響。

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線性聚乙烯亞胺Polyethylenimine產品應用舉例

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全部 細胞培養基與血清 產品分類

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